PG电子提供的人小胶质细胞HMC3培养说明书详细介绍了细胞培养的相关条件与步骤，帮助研究人员更好地操作和复苏细胞。

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代，传代后每2天换液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以供过渡对比之用。如果对比培养效果不理想，建议直接购买PG电子的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞达到良好状态后，浸满完全培养液并密封瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续操作。使用显微镜检查细胞生长情况，并拍摄不同倍数的图片保存（建议40x、100x及200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，如未提供照片则默认状态良好。

传代后，请使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养，换液后注意将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞动态，若细胞变圆并脱落，快速回到操作台，加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml PG电子的无血清冻存液（货号：C7001）混匀，转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱存放，若后期需转入液氮罐，则应在-80℃中存放24小时以上再转入液氮。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，外壁用75%酒精擦拭；
2. 将冻存管中细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞贴壁不牢，可能出现脱落现象，这属正常情况。如果脱离较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可用于对比）。沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬后，消化1-2分钟，最后加5ml完全培养基终止反应。再进行离心、重悬并按照1:2比例进行分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶后放入37℃、5% CO2培养箱中。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准

以下情况可申请重发：

• 细胞运输途中发生问题，导致细胞丢失或瓶身破损等；
• 细胞受到污染，如在收到产品48小时内提供真实实验结果；
• 常温发货情况下，经过24小时静置或干冰发货后24小时未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片；
• 如干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时或常温发货的细胞在静置4小时后并且未开封出现污染，均可重发；
• 细胞活性问题在收到7天内提供真实实验结果，并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，审核后方可重发；
• 收到细胞期间请每日拍照，若超3天未告知，视为产品合格；在4-7天内出现问题，如提供前3天照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任，情况符合可重发。

2）不予重发的情况

以下情况将无法申请重发：

• 客户自身造成的细胞污染；
• 客户未正确操作致使细胞状态进行不良；
• 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳；
• 细胞状态不良且未提供前3天照片；
• 培养时经过其它处理的细胞；
• 细胞收到后2天内未反馈的问题；
• 具体区分情况处理。

以上信息帮助您顺利进行人小胶质细胞HMC3的培养，确保与PG电子的合作皆为优质体验。