PG电子出品的猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品概述

产品名称：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)
包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引起的一种高度接触性、出血性及致死性传染病。其主要特征包括高热及微血管壁变性造成的广泛出血、坏死、干塞等现象，慢性表现为纤维素性坏死性肠炎。此试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，能够评价猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

原理

该试剂盒包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，采用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清及血浆中的猪瘟病毒抗体。实验中，若样本中含有猪瘟病毒抗体，则会与酶标板上的抗原结合，经过清洗后加入酶标记物，与复合物特异性结合，再通过TMB底物液反应生成蓝色产物，显色深浅与样品中的抗体含量成正相关。最终通过测定吸光值来判断样本是否含有猪瘟病毒抗体。

储存条件及有效期

本试剂盒应在2～8℃环境中保存，有效期为12个月。开封后的酶标板需避光保存于2～8℃，建议在2个月内使用完毕。

适用仪器

需使用具有450nm及630nm波长的酶标仪，配备37℃恒温设备及可调微量移液器。

样品准备

1. 按常规方法从动物全血中制备血清，确保血清清亮无溶血、无污染。样品在2～8℃下可保存1周，长期保存需置于-20℃。

2. 使用样品稀释液将待检血清按40倍稀释，例如5μl血清加入195μl稀释液中混匀。阴、阳性对照无需稀释。

3. 使用前将浓缩洗涤液恢复至室温以确保沉淀溶解，再用蒸馏水或去离子水稀释20倍成为工作洗涤液（19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 使用前将试剂盒置于室温30分钟以恢复温度。

2. 取所需的酶标板条，设置阴性/阳性对照各2孔，其余板条应及时密封并存于2～8℃。

3. 在阴、阳性对照孔中各加入100μl阴、阳性对照液，而样品孔则每孔加入100μl稀释后的样品。

4. 混匀后盖好盖板膜，在37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5. 甩去孔内液体，加入350μl工作洗涤液，经静置30秒后弃去，重复洗涤5次，并最后一次拍干孔内。

6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，再置于37℃避光反应30分钟。

7. 重复洗涤步骤5。

8. 每孔依次添加底物液A和底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜并置于37℃避光反应10分钟。

9. 每孔加入50μl终止液，混匀后于450nm（可用630nm作为参比波长）测定其吸光值。

参考值及结果判定

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值应≤0.3，阳性对照的平均OD值应≥0.6。
1. 样品的OD值为ODS；
2. 计算阈值：SP值 = (ODS - ODNC) / (ODPC - ODNC)；若SP值≥0.2，结果为阳性；SP值＜0.2，则为阴性；
3. 如果实验结果为阴性，表明猪只抗体水平不足，建议进行相应疫苗的补打。

实验方法的局限性

本试验主要用于定性检测猪血清及血浆中的猪瘟病毒抗体，根据SP值的高低可粗略评估抗体水平的强度。

注意事项

1. 实验过程中务必戴手套和穿工作衣，严格遵循消毒与隔离程序，所有实验废弃物需按传染物处理。

2. 终止液具腐蚀性，避免皮肤和衣物接触，若不慎接触应立即用大量自来水冲洗。

3. 酶标板应在室温恢复后再开袋，未用完的板条请放入带干燥剂的密封袋中保存。

4. 浓缩洗涤液在冷环境下容易结晶，使用前需恢复至室温以确保完全溶解。

5. 洗涤时确保各孔均充分加满液体，以防孔口游离酶未被洗净。

6. 用于检测的样品应保持新鲜。

7. 实验结果的判定应依赖于酶标仪的读数。

8. 不同批号的试剂不得混用。

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