双抗体夹心法是用于检测抗原的常见技术，其操作流程如下：

一、准备固相抗体

首先，将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体，接着通过洗涤步骤去除未结合的抗体和杂质。

二、添加受检标本

将待测标本加入反应体系，使其与固相抗体接触一段时间，促使标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，从而形成固相抗原复合物。之后进行洗涤，以去除未结合的物质。

三、加入酶标抗体

接下来，向固相免疫复合物中添加酶标抗体，使其与固相上的抗原结合。通过彻底洗涤去掉未结合的酶标抗体，此时固相载体上酶的量与标本中抗原的量成正比。

四、底物反应

然后，添加底物，夹心复合物中的酶会催化底物反应生成有色产物。根据颜色变化的程度，可以进行抗原的定性或定量分析。

应用案例

基于相同原理，可将大分子抗体分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，从而使用双抗原夹心法测定标本中的抗体。这种方法在临床检验中被广泛应用于检测多种大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP和hCG等。只需获取针对检验抗原的异性抗体，即可用于固相载体的包被和酶结合物的制备。

注意事项

值得注意的是，如采用抗血清作为抗体来源，固相载体及酶标使用的抗体最好来自不同种属的动物。如果选择单克隆抗体，通常需选择两个针对抗原不同决定簇的单抗，分别用于包被和制备酶结合物，以确保双位点夹心法的高特异性。此外，在一步法检测中的抗原浓度过高时，可能导致所谓的钩状效应，造成假阴性结果。为此，使用高亲和力的单克隆抗体可以有效减弱此现象。

此外，在检测HBsAg时，需要留意其亚型问题，因为HBsAg有多个亚型，如adr、adw、ayr和ayw，这些亚型的反应性相似，这也是使用单抗夹心法时需注意的事项。

类风湿因子干扰

双抗体夹心法在检测中还需注意类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种主要为IgM型的自身抗体，能与多种动物IgG的Fc段结合。当采用双抗体夹心法检测时，含有RF的血清标本可能会表现出假阳性反应。为消除RF的干扰，可以使用F(ab')或Fab片段作为酶结合物的试剂，因其不含Fc段。在此基础上，评估双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF影响已成为一项重要考核指标。

适用范围

双抗体夹心法特别适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适合用于半抗原或小分子单价抗原的检测。反应原理与双抗体夹心法相似，采用特异性抗原进行包被和制备酶结合物以检测相关抗体。但是，此方法的敏感度通常高于间接法，无需对受检标本进行稀释。以抗HBs的检测为例，这一方法常被选用，关键在于合适的酶标抗原制备，应根据抗原的结构选择合适的标记方法。

综上所述，双抗体夹心法为生物医疗检测提供了强有力的支持，尤其在检测重要生物标志物时，PG电子的应用将进一步推动这一技术的发展和普及。